人肾病蛋白nephrin酶联免疫分析.DOC

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资源描述

1、 人肾病蛋白(nephrin) 酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 96T0.5g/L -12g/L使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中肾病蛋白(nephrin)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人肾病蛋白( nephrin)水平。用纯化的人肾病蛋白(nephrin)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入肾病蛋白(nephrin),再与 HRP标记的肾病蛋白(nephrin)抗体结合,形成抗体-抗原- 酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的

2、黄色。颜色的深浅和样品中的肾病蛋白( nephrin)呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度( OD值),通过标准曲线计算样品中人肾病蛋白(nephrin)浓度。试剂盒组成12345630倍浓缩洗涤液酶标试剂20ml1瓶6ml1瓶12孔8条6ml1瓶6ml1瓶6ml1/瓶78终止液 6ml1瓶0.5ml1瓶1.5ml1瓶1份标准品(24g/L)标准品稀释液说明书酶标包被板样品稀释液显色剂 A液显色剂 B液9101112封板膜 2张密封袋 1个标本要求1标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20保存,但应避免反复冻融2不能检

3、测含NaN3的样品,因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP )活性。操作步骤1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。12g/L6g/L5号标准品4号标准品3号标准品2号标准品1号标准品150l的原倍 标 准品加入 150 l标准品稀释液150l的 5号标 准品加入 150 l标准品稀释液150l的 4号标 准品加入 150 l标准品稀释液150l的 3号标 准品加入 150 l标准品稀释液150l的 2号标 准品加入 150 l标准品稀释液3g/L1.5pg/ml0.75pg/ml2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操

4、作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50l,待测样 品孔中先加样品稀释液 40l ,然后再加待测样品 10l(样 品最终稀释度为 5倍)。加样 将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3.4.5.温育:用封板膜封板后置 37温育30分钟。配液:将 30倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30倍稀释后备用洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30秒后弃去,如此重复 5次,拍干。6.7.8.9.加酶:每孔加入酶标试剂 50l,空白孔除外。温育:操作同 3。洗涤:操作同 5。显色:每孔先加入显色剂 A50 l,再加入显色剂 B50l , 轻轻震荡混匀,3

5、7避光显色15分钟.10.终止:每孔加终止液 50l,终止反应(此时蓝色立 转黄色)。11.测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止液后 15分钟以内进行。操作程序总结:计算以标准物的浓度为横坐标, OD值为纵坐标,在坐标纸上 绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用 标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD值代入方程式, 计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。注意事项1试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封

6、袋中保存。2浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。3各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在 5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。4请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值大于标准品孔第一孔的 OD值),请先用样品稀释液稀释 一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(n5)。5封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6底物请避光保存。7严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异,以英文说明书为准。保存条件及有效期1试剂盒保存:;2-8。2有效期:6个月

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