1、1人白细胞介素 1（IL-1）酶联免疫检测试剂盒使用说明书使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理，来检测人白细胞介素 1（IL-1） ，只能用于研究用途，不得用于医学诊断。用 途：用于人血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素 1（IL-1）的测定。工作原理本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中人白细胞介素 1（IL-1）水平。向预先包被了人白细胞介素 1（IL-1）单克隆抗体的酶标孔中加入白细胞介素 1（IL-1） ，温育；温育后，加入生物素标记的抗 IL-1 抗体。再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合
2、的酶，然后加入底物 A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中人白细胞介素 1（IL-1）的浓度呈正相关。试剂盒组成 试剂盒组成 48 孔配置 96 孔配置 保存说明书 1 份 1 份封板膜 2 片（48） 2 片（96）密封袋 1 个 1 个酶标包被板 148 196 2-8 保存标准品：320ng/L 0.5ml1 瓶 0.5ml1 瓶 2-8 保存标准品稀释液 1.5ml1 瓶 1.5ml1 瓶 2-8 保存链霉亲和素-HRP 3 ml1 瓶 6 ml1 瓶 2-8 保存生物素标记的抗 IL-1 抗体 0.5ml1 瓶 1 ml1 瓶 2-8 保存显色剂 A 液
3、 3 ml1 瓶 6 ml1 瓶 2-8 保存显色剂 B 液 3 ml1 瓶 6 ml1 瓶 2-8 保存终止液 3ml1 瓶 6ml1 瓶 2-8 保存浓缩洗涤液 （20ml20 倍）1 瓶 （20ml30 倍）1 瓶 2-8 保存需要而未提供的试剂和器材1 37恒温箱。2 标准规格酶标仪。3 精密移液器及一次性吸头4 蒸馏水，25 一次性试管6 吸水纸注意事项1 从 2-8取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少 30 分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差3 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶
4、标仪读数为准.4 为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。5 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。6 底物 B 对光敏感，避免长时间暴露于光下。洗板方法手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少 0.35ml 注入孔内，浸泡 1-2 分钟。根据需要，重复此过程数次。自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中标本要求 1不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。2标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进
5、行试验，可将标本放于-20保存，但应避免反复冻融。操作程序1. 标准品的稀释：(本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。)160 ng/L 5 号标准品 120l 的原倍标准品加入 120l 标准品稀释液80 ng/L 4 号标准品 120l 的 5 号标准品加入 120l 标准品稀释液40 ng/L 3 号标准品 120l 的 4 号标准品加入 120l 标准品稀释液20 ng/L 2 号标准品 120l 的 3 号标准品加入 120l 标准品稀释液10 ng/L 1 号标准品 120l 的 2 号标准品加入 120l 标准品稀释液2. 根据代测样品数量加上标准品的
6、数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。3. 加样：1）空白孔，空白对照孔不加样品，生物素标记的抗 IL-1 抗体，链霉亲和素-HRP，只加显色剂 A&B 和终止液，其余各步操作相同；2）标准品孔：加入标准品50ul，链霉亲和素-HRP50ul(标准品中已事先整合好生物素抗体，故不加)；3）代测样品孔：加入样本 40ul，然后各加入抗 IL-1 抗体 10ul、链霉亲和素-HRP50ul，盖上封板膜，轻轻震荡混匀，37温育 60 分钟。4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用。5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去
7、液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。6. 显色：每孔先加入显色剂 A50ul，再加入显色剂 B50l，轻轻震荡混匀，37避光显色 10 分钟. 7. 终止：每孔加终止液 50l，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。38. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值） 。 测定应在加终止液后 10 分钟以内进行。9. 根据标准品的浓度及对应的 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的 OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。操作程序总结：检测范围：5 ng/L160 ng/L。规格：96T/盒保存：2-8。有效期：6 个月(2-8)。准备试剂，样品和标准品加入准备好的样品和标准品，生物素标记的二抗和酶标试剂，37反应 60 分钟洗板 5 次，加入显色液 A、B，37显色 15 分钟加入终止液15 分钟内读 OD 值计算
