1、水质细菌检验箱简介用途：使用于师团在实验室或野外条件下进行水中细菌总数和和大肠菌群的检验。必要时还可进行水中肠道致病菌（沙门氏菌属和志贺菌属）的检验。新款可测:细菌总数、总大肠菌群、大肠埃希氏菌、耐热大肠菌群性能：本箱操作简便、检验快速、结果准确。其中，水中细菌总数的检验采用 膜营养垫法。所用的培养基是新研制的无琼脂培养基。可获得与实验室条件下常规标准平板法同样的结果，水中大肠菌群的检验采用 膜营养垫法。所用的培养基是新研制的改良远藤培养基，比普通的远藤氏培养基能获得更加满意的检验结果。尤其是对水中损伤大肠菌的检验有较好的效果，这样对消毒后水的检验能获得更加安全可靠的结果；水中肠道致病菌沙门氏
2、菌属和志贺氏菌属的检验，采用常规和快速方法相结合。先用新研制的沙门氏菌属志贺氏菌属通用增菌培养基增菌，然后用协同凝集试验法进行检验，24 小时可初步报告结果，箱内还装有新研制的沙门菌属志贺氏菌属选择培养基，必要市可进行常规检验，并可获得准确的检验结果。整套装置由采样检验箱和选购部分-微型培养箱组成。可在野外或现场进行采样和检验，微型培养箱采用交、直流两用电源可在没有交流电条件下使用。箱内的各种培养基忽然试验器材用完后可随时与亿通电子有限公司联系补充。使用本检验箱时首先将箱内酒精灯装入酒精；酒精棉球瓶中装入 75%浓度的酒精。一、采样检验箱内器材和药品01、说明书 1 份02、DYII 型移液管
3、 1 支03、DYII 型移液管吸嘴 10 支04、接种棒 1 支05、金属镊子 1 把06、圆珠笔 1 支07、特种红铅笔 1 支08、塑料培养皿 20 付09、营养肉汤培养基 50 管10、改良远藤培养基 50 管11、沙门似志贺氏菌属增菌培养基 20 管12、协同凝集试剂 1 套13、沙门氏志贺氏菌增菌瓶 3 个14、改良 SS 选择琼脂 1 瓶15、克氏双糖铁培养基 1 瓶16、水样稀释瓶（50ml） 1 个17、酒精棉球瓶 1 个18、微孔 膜（ 35mm 0.45um） 3*100 张19、纸垫（ 47mm） 7*40 张20、小杯（45-150ml） 1 个21、酒精灯 1 付2
4、2、塑料注射器（20ml） 1 付23、细菌过滤器 1 套24、小毛巾 1 条25、火柴 1 盒26、塑帽试管 10 支二、采样检验箱使用方法1、 细菌中数检验方法1. 1 试验准备：1.1. 1 水样采集：采水容器事先灭菌或使用前用被检水反复冲洗数次，然后采水。1.1.2 移液管吸嘴的消毒：取下套在酒精灯上的支架，把支架小口端安装在酒精灯口上， 杯放在支架上，倒入适量水，把吸嘴放入 杯内，煮沸 5-10 分钟，备用。1.2. 肉汤营养纸垫制备：1.3. 1 将小皿用酒精棉球擦拭消毒，晾干后每皿加一片纸垫。1.2.2 取肉汤安瓶一支倒人小杯内，加入 15mi 蒸馏水或自来水煮沸溶解即为营养肉汤
5、。必要时。可以直接用开水冲泡溶解。1.2.3 取盛有纸垫小皿，每皿纸垫加营养肉汤 1.8-2.5ml（液体充盈程度以不淹没滤膜为宜） ，即为肉汤营养垫，备用。1. 3 检验水样：1.3. 1 细菌过滤器系统的组装；从检验箱中取出过滤器，将滤床 板端插入检验箱前侧箱壁与塑料板之间的夹缝内，把三通管带细塑料管一端插入滤器下面的孔内，三通管大孔端插入 20ml 注射器头下，接头处要严密。备用。1.3.2 细菌过滤器的处理：用燃着的酒精棉球擦拭细菌过滤器的滤床和漏斗，待凉后，取一片滤膜，放在滤床上，装上漏斗并拧紧。1.3.3 过滤水样：生活饮用水为 1ml，平分两份，水源水可同时做原水 1ml 和稀释
6、50 倍（箱内 50ml 小瓶放入 1ml 被检水源水，家 50ml 冷开水或无菌水）1ml 两个稀释度，水样加到滤器中后使之全部覆盖膜面，然后抽滤至水干，将阻菌滤膜面朝上贴于肉汤营养垫上。注意膜与营养垫之间不要有气泡。1.4 培养：37培养箱中培养 24 小时。1.5 菌落计数：计数膜上所有菌落数。细菌总数计数方法： 细菌总数（个/ml）= 膜上的平均菌落数 *稀释倍数1. 6 注意事项：1.6.1 检验细菌总数过程中应尽量做到无菌操作。1.6.2 每检验完一个水样应用燃着的酒精棉球烧灼漏斗和滤床后，再进行检验第二个样品。1.6.3 每次试验完毕，必须用干纱布把过滤漏斗和滤床等处擦干，以免腐
7、蚀漏斗。2、 大肠菌群检验方法：2.1 试验准备： 同细菌总数检验方法（1.1）2.2 远藤营养垫的制备：2.2.1 将小皿用酒精棉球擦拭消毒、晾干。每皿内加一片纸垫。2.2.2 取远藤培养基安瓶一支，倒人小杯内，从酒精棉球瓶内取出棉球挤压 1-2 滴酒精于培养基上使其刚好湿透，用玻棒搅匀，然后加 15ml 冷开水或蒸馏水，摇匀溶解即为远藤营养垫。2.2.3 取盛有纸垫培养皿，每皿纸垫加远藤培养液 1.8-2.5ml（液体充盈程度以不淹没滤膜为宜） ，即为远藤营养垫。2.3 检验水样：2.3.1 细菌过滤器系统的组装： 同细菌总数（1.3.1） 2.3.2 细菌过滤器系统的处理： 同细菌总数（
8、1.3.2）2.3.3 过滤水样：生活饮用水，应检 100-330ml，将被检水样倒入漏斗内至上刻度线处（100ml） ，检验 330ml 水量时，可过滤 100ml 后，再加 100ml，直至滤完330ml， （如遇不易过滤水，可分 2-3 张膜过滤，分别贴于 2-3 个远藤应营养纸垫上，结果将膜上菌落数相加计算） ，将膜取下，小心贴于备用的远藤营养纸垫上。此时应注意勿使滤膜与营养垫之间留有气泡；检验未处理的水源水，取 1ml 水眼个，方法：同细菌总数，不同处仅把阻菌膜贴于远藤营养垫上。2.4 培养：37培养箱中，培养 18-24 小时。2.5 菌落计算： 计数膜上带有金属光泽或深黑色菌落。
9、即为大肠菌数。 大肠菌群数计算方法：大肠菌群数（个/升）= 膜上菌落数 *稀释倍数 *1000被检水样体积(ml)2.6 注意事项：同一水样，同时检验细菌总数和大肠菌群时，可不处理滤器；其它项同细菌总数(1.6)3水中肠道致病菌（沙门氏菌属和志贺氏菌属）检验方法：3.1 快速检验法：3.1.1 增菌培养：3.1.1.1 直接增菌法：吸取待检水样 10ml 放入增菌瓶中，加入一小管（0.44g）沙门氏菌志贺氏菌通用增菌培养基，充分振摇搅拌使其溶解。然后置 37培养箱培养 24小时。3.1.1.2 浓缩增菌法：吸取待检水样 100ml（更大或更小体积的水样，视水质而定）通过滤膜过滤，然后将阻菌滤膜
10、取下，放入含有一小管（0.44g）沙门氏志贺氏菌通用增菌培养基的 10ml 增菌液中（可用被检水或无菌蒸馏水配制增菌液）置 37培养箱，培养 24 小时。3.1.2 协同凝集试验：具体步骤见“协同凝集试验方法” 。不同种类的抗原液（即不同种类的沙门氏菌、志贺氏菌增菌后的菌悬液）分别用对应的凝集试剂进行协同凝集试验，根据凝集与否判断为阳性或阴性。3.1.3 协同凝集试验方法：3.1.3.1 取 0.5ml 生理盐水将协同凝集试剂溶解，用手摇匀。3.1.3.2 取 1 滴凝集试剂于载玻片上，加一滴抗原液（经增菌液培养 24 小时的水样），充份混匀，1-3 分钟内观察结果。3.1.3.3 结果判断标
11、准：悬液完全透明，出现大量凝块和颗粒为+透明度稍差，出现大量凝块和颗粒为+悬液半透明，凝块和颗粒较少为+悬液不透明，有少量颗粒为+悬液浑浊，无颗粒出现为+以上为阳性，+为可疑。对照：标准抗原作阳性对照生理盐水作阴性对照3.1.3.4 注意：协同凝集试剂应置低温冷冻保存，有效期 3 年。3.2 常规检验方法：3.2.1 增菌培养：快速检验法中的直接增菌法和浓缩增菌法相同，其中志贺氏菌的增菌时间可以为 16-18 小时。3.2.2 平板分离：取上述经增菌的沙门氏菌、志贺氏菌培养液，用接种环化线接种改良 SS 选择琼脂平板，置 37培养箱中培养 24 小时。 （如使用其它选择培养基时，请注意对宋内氏
12、痢疾杆菌是否良好，还是不生长或生长很差） 。3.2.3 挑选菌落接种双糖管：每个平板挑取 5 个以上可疑肠道病原菌菌落，接种于双糖铁或三糖铁试管培养基中（将克氏双糖铁干燥培养基加水煮沸溶解后分装于塑帽试管中，3ml，高压蒸汽灭菌或水浴 10015 分钟后放成高层斜面，凝固后即成） 。置37培养箱中培养 18-24 小时。附：沙门氏菌属和志贺菌属在改良 SS 选择琼脂平板上的菌落特征：沙门氏菌属，菌落呈无色透明或半透明或中间有黑心，直径为 1-3 毫米（培养时间长时，有的菌落中心略呈微粉色，但与红色的大肠菌菌落完全不同） 。志贺氏菌属，菌落呈无色透明或半透明（宋氏痢疾杆菌的菌落中心有时略呈浅色）
13、 ，直径 1-3 毫米。3.2.4 生化反应及血清学检验：沙门氏菌属：在双糖铁或三糖铁培养基上，底层变黄（分解葡萄糖产酸） ，产气或不产气（如伤寒沙门氏菌不产气） ，一般产 H2S；斜面呈红色（不分解乳糖） 。用沙门氏菌多价血清或单价抗血清进行凝集试验，根据凝集与否判断为阳性或阴性。志贺氏菌属：在双糖铁或三糖铁培养基上，底层变黄（分解葡萄糖产酸） ，不产气，无动力，不产 H2S；斜面呈红色（不分解乳糖） 。用志贺氏菌多价血清或单价血清进行凝集试验，根据凝集与否判断为阳性或阴性。中华人民共和国饮水卫生标准（细菌指标）饮水类型 国标代号 细菌总数（个/1ml）大肠菌数生活饮用水 GB 5749-85 100 3 个/1000ml军队战时饮用水 GJB 651-89 100 1 个/100ml饮用天然矿泉水 GB 8537-87 100 3 个/1000ml
