1、模拟运输过程中机械伤对苹果生理及品质的影响（王宇星 2009236134，洪海冰 2009236131，庄晓曼 2009236132，洪纳熙 2009236128，林铮 2009236130，张少映 2009236127）11 实验目的果蔬在运输过程中避免不了受到一些机械伤。本实验拟在通过模拟苹果运输过程中的机械伤对果蔬采后生理及品质的影响。1.2实验原理利用坠落损伤模拟果蔬运输过程中对果蔬造成的各种如碰撞、擦伤一类的机械伤所造成的一系列生理及品质上的影响。通过测定果蔬受到机械伤前后及不同程度机械伤之后其可溶性固形物变化、电导率变化、重量变化、褐变程度、硬度变化、过氧化物酶活性不同的变化。1.
2、3实验前处理编号为 1、2、3、4 号苹果为经过坠落损伤的苹果，参照苹果为不经过任何处理的。取四个大小形状比较相近的苹果，对其进行不同程度的摔伤（编号为1、2、3、4 号的苹果分别从高度为 1米处做自由落体运动 1、2、3、4 次，参照组不做任何处理） 。并配置一个放置在正常环境下的参照苹果，不对其进行机械伤害操作，并放置一个小时。之后对苹果进行各种理化性质的测量。2可溶性固形物测定及电阻变化的测定2.1仪器的校正 打开手持式折光仪盖板，用擦镜纸或棉花小心擦干棱镜玻璃面。在棱镜玻璃面上滴 2滴蒸馏水，盖上盖板。朝向光源明亮处，于水平状态，从接眼部处观察，并旋动刻度调节螺旋，使分界线面刚好落在零
3、线上。2.2操作过程打开盖板，将水擦干，在棱镜玻璃面上滴 2滴果蔬汁，朝向光源明亮处观测，读取视野中明暗交界线上的刻度，即为果蔬汁中可溶性固形物含量（%） 。重复操作测定苹果的机械伤部位可溶性固形物含量及没受伤部位的可溶性固形物含量。应万用电表调节到欧姆档，将两季扎入苹果对称部位，在机械损伤前测一次，于机械损伤 1h后再测一次。2.3记录并整理数据。苹果编号 1 2 3 4 参照撞击前可溶性固形物含量（%） 16 16 18 16 14.5撞击部位可溶性固形物含量（%）13 12.5 14 11.5 撞击前电阻（欧姆，K） 120 125 120 130 110撞击后电阻（欧姆,K） 135
4、140 150 120 051015201 2 3 4 参 照苹 果 可 溶 性 固 形 物 含 量 变 化 曲 线样 品 号可溶性固形物含量（%） 撞 击 前 可 溶 性 固形 物 含 量 （ %）撞 击 部 位 可 溶 性固 形 物 含 量 （ %）0501001502001 2 3 4 参 照苹 果 电 阻 变 化 曲 线样 品 号电阻（K） 撞 击 前 电 阻 （ 欧姆 ， K）撞 击 后 电 阻 （ 欧姆 ,K）3重量变化及褐变程度的测定3.1重量变化的测定：将苹果置于电子天平上测量其未受机械伤之前的质量，1h之后再测量苹果受机械伤厚的质量。3.2褐变程度：将受到机械伤的苹果核参照苹
5、果一同放置在相同环境下 12h，肉眼观擦其褐变比例，记录并整理数据。苹果编号 1 2 3 4 参照最初重量（g）214.7082 211.1192 200.4265 192.6292 187.0495损伤后重量（g）214.4012 210.7027 199.8622 192.0030 187.0283最初褐变程度（%）0 0 0 0 0最终褐变程度（%）5% 11% 16% 18% 1%1701801902002102201 2 3 4 参 照苹 果 质 量 变 化样 品 号苹果质量（g）最 初 重 量 （ g）损 伤 后 重 量 （ g）4硬度变化预先在果实对应两面的最大横径处(果实腰部)
6、薄薄削去一层皮(削皮的厚度、面积以刚露出果肉，略比测头大些即可)，用一手握果实，另一手握住硬度计，将果实硬度计的探头垂直地对准果面测试处，缓慢施加压力，使测头插入果实到测头顶端部分压人果肉时为止（至规定的标线） ，即可在指示器上读出硬度值。重复操作测定苹果的机械伤部位硬度及没受伤部位的硬度。苹果编号 1 2 3 4 参照撞击前硬度 9.0 9.5 9.0 8.5 8.5撞击后硬度 2.5 2.5 1.5 1.5 02468101 2 3 4 参 照苹 果 硬 度 变 化 柱 状 图样 品 号硬度撞 击 前 硬 度撞 击 后 硬 度5过氧化物酶活性变化5.1原理 过氧化物酶（peroxidase
7、,POD）是植物体内普遍存在的、活性较高的一种氧化还原酶，它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等生理过程和生化代谢过程都有密切关系，在果蔬生长发育、成熟衰老、病原菌感染、贮藏加工条件改变时，其活性不断发生变化。在有过氧化氢存在下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，该物质在 470 nm处有最大吸收，可用分光光度计测量 470 nm 的吸光度变化测定过氧化物酶活性。 5.2实验材料、试剂与仪器设备 （一）实验材料 苹果 （二）试剂配制 1、1/15 M、pH 6.0 磷酸缓冲液（提取缓冲液）：A液：1/15 M Na2HPO4 溶液，取 2.3876 g Na2HPO4 溶于 100
8、mL 蒸馏水中；B液：1/15 M NaH2PO4 溶液，取 2.0801 g NaH2PO4 溶于 100 mL 蒸馏水中；取 A液 10mL 与 B液 90mL摇匀混合。2、0.1mol/L、pH 5.5 醋酸-醋酸钠缓冲溶液：A液：0.2M 醋酸溶液：量取 11.55mL 冰醋酸，加蒸馏水稀释至 1000mL；B液：0.2M 醋酸钠溶液：称取 16.4g 无水醋酸钠（或 27.2 g 三水合醋酸钠） ，加蒸馏水溶解后定容至 1000mL；取 68 mL A液与 432 mL B 液混合，调节 pH至 5.5，加蒸馏水稀释至 1000mL。3、0.08 H2O2 溶液： 取 30过氧化氢
9、2.67ml 稀释到 100ml 混匀后即成母液，可放置于冰箱内保存3天，临用时再从母液取 10ml稀释到 100ml即为工作液；4、0.1 邻甲氧基酚溶液（愈创木酚）：取 0.1g邻甲氧基酚溶于 100ml蒸馏水中；或配制 25mmol/L愈创木酚溶液：取 320微升愈创木酚，用 pH 5.5 醋酸缓冲溶液稀释至 100mL。（三）仪器设备 分光光度计，研钵，恒温水浴锅，100ml、1L 容量瓶，吸管，移液管、离心机。5.3实验步骤 粗酶液提取：取样品 1克，加入适量 pH 6.0磷酸缓冲液研磨成匀浆，转入100ml容量瓶，用 pH 6.0 磷酸缓冲液定容至刻度。于 30水浴中保持 30mi
10、n，中间搅动数次。用 4层纱布过滤，滤液装入 50ml离心管中，于 4，10000rpm离心 15min，过滤上清即得粗酶液。酶活测量：把 1ml pH 5.5 醋酸缓冲溶液、1ml 粗酶液（如酶活性过高可稀释） 、1ml 0.1邻甲氧基酚溶液加入到 10ml具塞刻度试管中，混匀，置于 30 水浴中 5分钟左右，使温度达到平衡，加入 1ml 0.08H2O2 溶液（加入时立即开始计时） ，摇匀并迅速倒入比色皿于 470nm比色，在反应 1min时记录 O.D值。参比液用 1ml水代替 0.08H2O2。5.4实验结果POD酶活性表示方式：以 A值直接表示其相对活性，单位为 A470nm/1mi
11、n gFW 。注意：加入过氧化氢后要迅速比色，如不能在 1min时读数，可采用下列方式：在反应混合液中加入过氧化氢后后，立即开启秒表记录时间，于分光光度计上测量波长 470 nm 下的吸光度值，每隔 1min 读数一次，共记录 4min。 以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小，即以 A 470nm/min gFW 表示之。也可以用每 min内 A 470变化 0.01为 1个过氧化物酶活性单位（u）表示。 过氧化物酶活性 u/g.min= A470 VT WVs0.01t 式中： A470反应时间内吸光度的变化。 W 样品重，g。 VT 提取酶液总体积， mL。 Vs 测定时取用酶液体积, mL。 t 反应时间，min。5.5实验数据苹果样品 1 2 3 4A470nm 0.119 0.127 0.138 0.1456实验结论苹果撞击损伤前后各物理性质发生明显变化，（1） 重量变少，并且随着损伤程度的增加变化更大；（2） 电阻上升；（3） 损伤部位发生褐变，并且随损伤程度的增加褐变面积变大；（4） 损伤部位硬度较完好部位低；（5） 损伤部位多酚氧化酶活性增强等；（6） 损伤的苹果外观、果形、风味等变差。
