1、1正交试验法优选菊明降压颗粒剂的提取工艺邓超澄，冯看，陈卫卫*，卢苇，何春玲，卢澄生 (广西中医学院，广西，南宁，530001 )摘要：目的：优选其菊明降压颗粒剂最佳提取工艺。方法：以得膏率和蒙花苷含量为评价指标，以乙醇浓度、溶剂倍量、提取时间和提取次数为主要影响因素，用 L9 (34)正交试验法优选提取工艺。结果：最佳提取工艺为加 8 倍量的 70%乙醇、煎煮 2 次，每次煎煮 1 小时。结论：提取工艺稳定、合理、可行。关键词：菊明降压颗粒剂；正交试验；提取工艺；蒙花苷Optimization on the extraction technique of Jumingjiangya gran
2、ules with orthogonal designDeng chaocheng, Feng kan,Chen weiwei*, Lu wei, He chunling, Lu chengsheng(Guangxi Traditional Chinese Medical University, Nanning, Guangxi 530001, China)Abstract: Objective: The orthogonal test was used to optimal ethanol-extraction technique of Jumingjiangya granules. Met
3、hods: Observation was made on the effect of alcohol concentration, solvent ratio, extraction time and extraction frequency on the extraction result by orthogonal L9 (34) design, with the content of linarin as the index. Results:The best extraction process was as follows: adding 8 times volume of 70a
4、lcohol，extracting twice and refluxing for 1 h . Conclusion:The extraction process of Jumingjiangya granules was stable, reasonable and reliable. Key words: Jumingjiangya granules; orthogonal test; extraction technology ; linarin菊明降压颗粒剂 1由菊明降压片（收载于卫生部药品标准中药成方制剂第二册）剂改而来，由野 菊 花 和 决 明 子 两 味 中 药 组 成 ， 临床
5、上用 于 治 疗 原 发 性 高 血 压 、 慢 性 肾 炎 性 高 血 压 。但因原方剂型为片剂，且由原药材打粉压片，因此服用剂量大，不方便临床用药，将其制成颗粒剂将有利于解决临床用药问题。 故 本实验拟采用 L9(34)正交试验，以得膏率和野菊花中有效成分蒙花苷为考察指标，基金项目：广西青年科学基金（桂科青0832052） 。第一作者简介：邓超澄（1964-），女（ 汉族），讲师，研究方向：中药化学成分及质量标准研究。E-mail：nnhouyucheng1 ，Tel：13977197531。*通讯作者简介：陈卫卫（1969-） ，女（汉族），副教授，研究方向：药物新剂型、新剂型的研发。E
6、-2mail:weiwei690413ey-，Tel：13211355569。筛选出菊明降压颗粒剂最佳提取工艺，为进一步优化其制备工艺提供参考。1 仪器与试剂 美国安捷伦 Agilent1100 高效液相色谱仪；北京赛多利斯 BS224S 电子分析天平；美国月旭Welchrom-C18 柱（ 2504.6mm，5m ）；上海亚荣 RE-52 旋转蒸发器 ； 蒙花苷对照品（批号：080701，购于成都曼思特生物科技有限公司）；野菊花和决明子药材均购于广西南宁市老百姓大药房，经鉴定检查，符合中国药典（2005 年版部）有关标准；供试品溶液制备均使用分析纯试剂，高效液相色谱使用试剂为色谱纯试剂。2
7、实验方法2.1 正交试验设计 根据文献报道 26及预试验结果野菊花和决明子降压的活性成分均具有一定的水溶性和醇溶性，其主要降压成分蒙花苷在醇中溶解度比在水中高，故采用乙醇作为提取溶剂，本文以乙醇浓度、溶剂倍量、提取时间和提取次数为主要影响因素，每个因素 3 个水平，用 L9(34)正交表进行工艺优选。提取效果通过两个指标考察，一是方中君药野菊花中的有效成分蒙花苷含量，二是浸膏得率，并按蒙花苷含量为 0.5、浸膏得率为 0.5 的权重系数对这两个指标进行综合加权评分。因素、水平设计及正交结果见表 1、表 2。2.2 蒙花苷含量测定2.2.1 色谱条件 色谱柱：Lichrospher-C 18柱（
8、250 mm 4.6mm，5m） ；流动相 78：乙腈-0.1%磷酸（27：73） ；流速：1.0ml/min；G1314A-VWD紫外检测器，检测波长：324nm；柱温：35。理论塔板数按蒙花苷峰计算不低于5000。在上述色谱条件下进样10l，蒙花苷对照品，供试液和阴性对照的高效液相色谱图见图1。图1 蒙花苷对照品（A）、样品供试液（B）和阴性对照（ C）HPLC图 a 蒙花苷2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取蒙、花苷对照品适量， 置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，配成含蒙花苷0.138mg/ml的对照品贮备溶液。aa A BaC32.2.2 供试品溶液的制备 根据处方称取药材，按正
9、交设计要求加醇加热回流提取，趁热过滤，滤液回收乙醇，并定容至1000ml。精密量取10ml，置分液漏斗中，用水饱和正丁醇20、20、10ml分别萃取三次，分取正丁醇层，于蒸发皿中水浴挥干，残渣用甲醇定容至10ml 量瓶中，即得供试品溶液。2.2.3 阴性对照溶液的制备 根据处方称取药材（不加野菊花），按“2.2.2”项下方法制备，即得。2.3 浸膏得率测定 精密量取各个正交试验号的醇提取液 10ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于烘箱 105干燥 3 小时，置干燥器中冷却至室温，迅速精密称重，计算浸膏得率。结果见表 2。表 1 因素、水平设计表表 2 正交试验设计表及结果因 素
10、结 果试验号 A B C D 浸膏得率(%) 蒙花苷含量(mg/g)综合评分1 1 1 1 1 19.64 2.5394 61.792 1 2 2 2 29.93 3.3729 87.213 1 3 3 3 36.52 3.5653 98.714 2 1 2 3 37.40 3.5738 1005 2 2 3 1 26.19 3.1408 78.966 2 3 1 2 27.37 3.0644 79.477 3 1 3 2 27.96 2.6697 74.738 3 2 1 3 29.74 3.2546 85.39 3 3 2 1 22.36 3.1341 73.67K1K2K382.5708
11、6.14377.90078.84083.82383.95075.52086.96084.13371.47380.47094.670因 素 水平 乙醇浓度（% ）A提取时间（h）B加醇量（倍） 提取次数（次）C D1 60% 0.5 6 12 70% 1 8 23 80% 1.5 10 34R 8.243 5.110 11.440 23.197表 3 正交试验方差分析F0.05（2,2）19.0002.4 数据分析 从表 2 数据极差可以看出，影响提取效果的各因素作用主次为 DCAB，得到的最佳提取工艺为 A2B3C2D3。从表 3 的方差分析结果表明，A、B、C、D 因素对实验结果的影响均无显
12、著性差异(P0.05)，从生产上节约能源、时间的角度考虑，故选定 A2B2C2D2 为最佳提取工艺，即加 8 倍量的 70%乙醇回流提取 2 次，每次 1 小时。2.5 验证试验 为了保证提取工艺的重现性和可行性，应对优选的方案进行验证试验，结果标明，该工艺稳定可行，重现性较好，结果见表 4。表 4 验证试验因 素实验号试验号 A B C D蒙花苷 浸膏得率 综合评分 RSD%（mg/g） （%） （% ）1 70% 1h 8 倍 2 次 3.399 33.56 99.582 70% 1h 8 倍 2 次 3.143 32.77 94.65 2.143 70% 1h 8 倍 2 次 3.341
13、 33.84 99.153 讨论3.1 正交试验考察指标的确定 野菊花为本方的君药，主要含有蒙花苷等成分，臣药决明子主要含有大黄酸 9。采用君药野菊花的活性成分蒙花苷作为药材质量控制的考察指标。因中药复方制剂以多种成分发挥综合疗效，以其中一种或几种活性成分往往不能代表处方的药效，故仅以活性成分为指标筛选提取工艺具有一定局限性，因此加以得膏率作为第二考察指标，旨在进一步保证试验数据的准确性。3.2 流动相的选择 参照文献采用过多种比例流动相进行预试验，如：乙腈-0.1%磷酸(30:70)、乙腈-0.1%磷酸(22:78)、乙腈-0.1%磷酸(23:73)等，结果在使用乙腈-0.1%磷酸(23:7
14、3)作为流动相时发现蒙方差来源 差方和 自由度 方差 F 值 显著性 P 值A 102.530 2 2.012 19.000 P0.05B 50.962 2 1.000 19.000 P0.05C 213.053 2 4.181 19.000 P0.05D 820.665 2 16.103 19.000 P0.05误差 50.96 25花苷峰周围无明显杂志峰，分离度、对称因子均较佳。故选用流动相乙腈-0.1%磷酸(27:73)为蒙花苷含量测定的流动相。3.3 供试品制备方法 在供试品制备中，经水饱和正丁醇液萃取处理过的供试液，杂质峰较少，对蒙花苷的色谱峰无干扰，因此采用水饱和正丁醇对供试品进行
15、纯化处理。3.4 最佳工艺的选择 从正交分析结果可知， A2B3C2D3 为最佳的提取工艺，且从方差分析表可知，各因素水平并无显著性差异，结合大生产实际情况，用醇为提取溶剂，并且回流 3 次，不但增大乙醇及燃料用量，也给回收、浓缩等实际操作带来困难，因此，选定 A2B2C2D2 为本方的最佳提取工艺。参 考 文 献1 中华人民共和国卫生部药典委员会. 卫生部药品标准中药成方制剂第 二 册 M ， 北 京 :人 民 卫 生出 版 社 ， 1991， 76.2 陈士翠. 正交试验法优选痤疮平颗粒的提取工艺J . 现代中药研究与实践，2006，20(2) ：54.3 杨阳，姚华. 药用菊花总黄酮提取
16、方法的比较J. 淮海医药，2007，25(6) ：564.4 罗显华，郁建生，杨政水.野菊花总黄酮提取工艺的比较J. 安徽农业科学，2007，35(26)：8116.5 阮俊, 黄永林.野菊花总黄酮提取方法研究J.中成药， 2004，26(2) ：153.6 郭金华.近年来决明子的药理药化临床研究进展J. 中国中医药信息杂志，1999，6(12) ：23.7 陈翠英，袁子民，程岚，等. HPLC 法测定珍菊降压片中蒙花苷含量J.辽宁中医杂志，2007，34(4)：501.8 魏娜，王强.野菊花及其相关制剂中蒙花苷的含量测定J. 药学与临床研究，2007，15(3)：221.9 国家药典委员会 . 中华人民共和国药典 M . 2005 年版一部，北京：化学工业出版社，2005，219，98.
