1、TEL:4001610125 Web: Catalog #:95193Hu人脑源性神经因子(BDNF)酶联免疫分析（ ELISA）试剂盒使用说明书 96t目 的： 本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中人脑源性神经因子(BDNF)的含量。检测范围： 5.0ng/L -100ng/L实验原理：本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人脑源性神经因子(BDNF)水平。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被抗原的微孔中依次加入人脑源性神经因子(BDNF)，再与 HRP 标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，
2、 并在酸的作用下转化成最终的黄色。 颜色的深浅和样品中的人脑源性神经因子(BDNF)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值） ，通过标准曲线计算样品中人脑源性神经因子(BDNF) 浓度。试剂盒组成：Reagent Quantity酶标包被板 12well8strips标准品: 480pg/mL 10.5ml标准品稀释液 11.5ml酶标试剂 16ml样品稀释液 16ml显色剂 A 液 16ml显色剂 B 液 16ml终止液 16ml30 倍浓缩洗涤液 120ml30flod说明书 1封板膜 2密封袋 1样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固 10-20 分钟，离心
3、20 分钟左右（2000-3000 转/分） 。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。2. 血浆：应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合 10-20 分钟后，TEL:4001610125 Web: Catalog #:95193Hu离心 20 分钟左右（2000-3000 转/ 分） 。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。3. 尿液：用无菌管收集，离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分） 。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20 分钟左右（
4、2000-3000 转/分） 。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用 PBS（PH7.2-7.4 ）稀释细胞悬液，细胞浓度达到 100 万/ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分） 。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBS，PH7.4 。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持 2-8的温度。加入一定量的 PBS（PH7.4） ，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分） 。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
5、6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20保存，但应避免反复冻融.7. 不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤：1. 标准品：其浓度为 1,00pg/mL(贮液) 。先将其稀释为 100pg/mL(标准曲线最高浓度)后，再准备 5 个稀释标准品的 EP 管，每个 EP 管中加入 150L 的标准品稀释液，如图所示依次倍比稀释成 100pg/mL, 50pg/mL,25pg/mL, 12.5pg/mL, 6.25pg/mL, 3.12pg/mL,，标准品稀释液(0pg/mL)直接
6、作为空白孔。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液Tube 0 1 2 3 4 5pg/mL 1.00 50 25 12.5 6.25 3.122. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40 l，然后再加待测样品 10 l（样品最终稀释度为 5 倍） 。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置 37温育 30 分钟。4. 配液：将 20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20 倍稀释后备用。5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30
7、 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50 l，空白孔除外。TEL:4001610125 Web: Catalog #:95193Hu7. 温育：操作同 3。8. 洗涤：操作同 5。9. 显色：每孔先加入显色剂 A50 l，再加入显色剂 B50 l，轻轻震荡混匀，37避光显色 15 分钟.10. 终止：每孔加终止液 50 l，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值） 。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。注意事项：1 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开
8、封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值大于标准品孔第一孔的 OD 值） ，请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（n5） 。5 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6 底物请避光保存。7 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9 本试剂不同批号组分不得混用。计算：以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。（此图仅供参考） 试剂盒性能：1.样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.990 以上。2.批内与批见应分别小于 9%和 11%3.保存条件及有效期：a.试剂盒保存：2-8。b.有效期：6 个月
