1、猪霍乱毒素 (CT)ELISA 检测试剂盒检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA） 。往预先包被猪霍乱毒素(CT)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB 显色，TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的猪霍乱毒素(CT)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值） ，计算样品浓度。样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后， 3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2.
2、血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心 30 分钟取上清。3. 细胞上清液： 3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心 10 分钟取上清。5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品1. 酶标仪（450nm）2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL 、200-1000uL3. 37恒温箱操作注意事项1. 试剂盒保存在 2-8 ，使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常
3、现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。3. 预处理后的样本无需稀释，直接取 10L加样即可。4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。5. 所有液体组分使用前充分摇匀。试剂盒组成名称 96 孔配置 48 孔配置 备注微孔酶标板 12 孔8 条 12 孔4 条 无标准品（400 pg/ml） 0.5mL 0.5mL 按说明书进行稀释标准品稀释液 6mL 3mL 按说明书进行稀释样本稀释液 6mL 3mL 按说明书进行稀释检测抗体-HRP 6mL 3mL 无20洗涤缓冲液 20mL 20mL 按说明书进行稀释底物 A
4、 6mL 3mL 无底物 B 6mL 3mL 无终止液 6mL 3mL 无封板膜 2 张 2 张 无说明书 1 份 1 份 无自封袋 1 个 1 个 无注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：400、200、100、50、25 、0pg/ml.试剂的准备20洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按 1：20 稀释，即 1 份的 20洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。洗板方法1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板 5 次。2. 自动洗板机：每孔注入洗液 350L，浸泡 1min，洗板 5 次。操作步骤1. 从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板
5、条，剩余板条用自封袋密封放回 4。2. 设置标准品孔、样本孔和空白孔，空白孔什么都不加；标准品孔各加不同浓度的标准品 50L；3. 待测样本孔先加待测样本 10L，再加样本稀释液 40L；4. 随后标准品孔和样本孔中（空白孔不加）加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体 50L， ，用封板膜封住反应孔，37 水浴锅或恒温箱温育 60min。5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板 5 次（也可用洗板机洗板） 。6. 所有孔加入底物 A、B 各 50L，37 避光孵育 15min。7. 所有孔加入终止液 50L，15min 内，在 4
6、50nm 波长处测定各孔的 OD 值。结果判断绘制标准曲线：在 Excel 工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应 OD 值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。试剂盒性能1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数 R 值，大于等于 0.9200。2. 灵敏度：最低检测浓度小于 1.56 pg/ml。3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4. 重复性：板内、板间变异系数均小于 15%。5. 贮藏：2-8，避光防潮保存。6. 有效期： 6 个月7. 检测范围： 6.25pg/ml-400pg/ml免责声明1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或猪体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。2. 严格按照说明书操作，不同批号不可交换使用，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。
