重组质粒DNA的提取,目的：1.掌握碱裂解法的原理 2.掌握重组质粒DNA的提取方法和操作,原理：,碱变性抽提质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离的目的。在PH高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离，当以PH4.8的缓冲液NaAc/KAc调至PH至中性时，只有变性质粒可复性，通过离心，可与其他物质分离。,器材与试剂：,微量加样枪，高速离心机，恒温振荡摇床，蒸汽消毒器，涡旋振荡器，恒温水浴锅，双蒸水器，冰箱，Takara质粒抽提试剂盒 标本：含PUC119+U6的大肠杆菌,操作：,1.从平板上挑取单菌落接种至1-4ml的含有抗生素的液体培养基中，37 ，150rpm/h过夜培养，时间大概14-16小时 2.取1.5ml培养液至1.5ml离心管中，12000rpm/s ，离心2min,弃上清。 3.用250ul的Solution （含RNase A）充分悬浮细菌沉淀（注：不要残留细小菌块，可以振荡悬浮） 4.加入250ul的Solution轻轻上下翻转
