E.coli JM109感受态细胞的制备与转化,1.目的（1）掌握大肠杆菌感受态细胞的原理和方法 （2）掌握制备大肠杆菌感受态细胞的操作方法,实验原理:,感受态就是细菌吸收转化因子的生理状态，只有发展为感受态的细胞才能稳定摄取外来的DNA分子。目前常用的感受态细胞制备方法有CaCl2 法，简便易行,且其转化效率完全可以满足一般实验的要求,制备出的感受态细胞暂时不用时,可加入占总体积15的无菌甘油于-70保存(半年),因此CaCl2法为使用更广泛。CaCl2法制备感受态细胞的原理是：细菌处于0的CaCl2低渗溶液中，菌体细胞膨胀成球形，同时Ca2+使细胞膜磷脂层形成液晶结构，使位于外膜和内膜间隙中的部分核酸酶解离，诱导形成感受态细胞。待转化DNA和Ca2+形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸盐复合物粘附于细胞表面（羟基来源于细胞壁上的糖，磷酸来源于DNA），经42短时间热激处理，细菌细胞膜的液晶结构发生改变，出现许多间隙，通透性增加，促进细胞吸收DNA复合物。在营养丰富的培养基上生长数小时后，受体细菌分裂增殖，被转化到细菌细胞中的重组子基因得到表达，在选择性培养基平板上，可筛选出所需的阳性转化子
