小鼠肝脏组织总RNA的提取及RT-PCR.ppt

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资源描述

一 小鼠肝脏组织总RNA的提取(Trizol法提取),目的: 1.掌握组织细胞中总RNA提取的基本原理 2.熟悉Trizol法提取总RNA的原理和操作,原理: Trizol是一种新型总RNA抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物质,能迅速破碎细胞,再加入氯仿后形成两相,变形的DNA与蛋白质位于两相的交界面,RNA保留于上层水相 Trizol适用于从多种组织和细胞中快速分离总RNA 器材与试剂: EP管、加样枪、离心机、振荡器、匀浆器、Trizol Reagent 、氯仿、异丙醇、75%乙醇、DEPC水 标本:小鼠肝脏,操作:,1秤取组织:先剪碎小鼠肝脏组织,称量100mg组织,加1.0ml的 Trizol,用匀浆器匀浆 2.各层相分离:室温静置5分钟,12000转/分,4离心10分钟,将上清液转移到另外一个EP管中 3加入1/5体积的上清液量的氯仿,剧烈振荡混匀30 412000转/分,室温离心10分钟,5将上清液小心转移到RNase-free 1.5ml离心管里,加入与上清等体积的异丙醇,室温下放置10min, 【注意:不要吸取任何中间层物质,否则会出现Genomic DNA污染】 6.120

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