race技术原理和操作(共5页).doc

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RACE(rapid amplification of cDNA ends)技术的原理和操作 近年来随着生物技术的不断发展,出现了许多克隆新基因的方法和手段,如图谱克隆技术、转座子标签技术、mRNA差异显示技术、基因组减法技术以及cDNA文库筛选技术等。但上述方法大多具有实验周期长、技术步骤烦琐且工作量大等特点。cDNA末端快速扩增技术(,)是一种基于PCR从低丰度的转录本中快速扩增cDNA的5和3末端的有效方法,以其简单、快速、廉价等优势而受到越来越多的重视。 经典的技术是由Frohman等(1988)发明的一项技术,主要通过RT-PCR技术由已知部分cDNA序列来得到完整的cDNA 5 和3 端,包括单边PCR和锚定PCR。该技术提出以来经过不断发展和完善,克服了早期技术步骤多、时间长、特异性差的缺点(Frohman等,1995:Schaefer,l995: Chen,1998: Bespalova等,1998: Matz等11999)。对传统RACE技术的改进主要是引物设计及RT-PCR技术的改进: 改进之一是利用锁定引

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