RT-PCR技术相关曲线解读(共4页).doc

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RT-PCR技术相关曲线解读 FreeScience宗旨:科学自由分享;人人平等;共求真理上周为大家介绍了RT-PCR的操作步骤,不知道小伙伴们是否有所收获呢?今天将进一步为大家解读RT-PCR技术中的一些曲线,希望大家对此有更深入的认识。RT-PCR技术中主要的曲线有下面三种:1. 扩增曲线随着实验的进行,扩增产物不断累积,相应的荧光信号也不断在增加,每进行一个循环就采集一次荧光的信号,经过一定的循环数后(比如40个循环),就可以得到下面的扩增曲线图(横坐标代表扩增的循环数cycle,纵坐标代表荧光的强度)。这其中还需要弄清楚一些基本概念,如:基线:指在PCR扩增反应的最初的几个循环里,荧光信号变化不大。接近一条直线,该直线叫做基线。这个了解即可,对实验操作没什么影响。阈值线:一般来说,前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号,阈值的设定就是3-15个循环荧光信号标准差的10倍,在PCR扩增的指数期(如图中箭头所指)。说的这么严肃,其实很多仪器自动设定的阈值线基本能够满足我们的实验要求,不需要我们手动设置的。CT值:我们常会用CT值来计算我们的相对

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