DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳实验(共4页).doc

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Aptamer的稳定性考察聚丙烯酰胺凝胶电泳Aptamer识别肿瘤细胞若选择4识别,则需要提前控温离心机,且样品在上样检测前宜放置于冰中;37就不用控温了。Aptamer浓度:荧光标记的是50M,没有标记的是100MDNA提取-注意实验中戴好橡胶手套,穿好实验服,以防苯酚粘到皮肤上。1. 取7.3l aptamer(100M)于1460l小鼠血清(无需过滤)中,在37细胞培养箱中孵育;2. 于不同时间点(6h, 5h, 4h, 3h, 2h, 1h, 1min)取200l该小鼠血清到新的EP管中,加入200l(等体积)的苯酚-氯仿(取苯酚-氯仿之前先将苯酚-氯仿混匀),混匀,管中溶液变浑浊;3. 用15000转/分离心10分钟,管中出现3层:上清、白色变性蛋白层、苯酚层;4. 取上清到新的EP管中。在原EP管(变性蛋白层和苯酚层)中加入200lTE溶液,混匀(该步进一步提取残留的DNA);5. 用15000转/分离心10分钟,收集上清;6. 重复4、5步直到上清澄清;7. 在上清中加入等体积的氯仿(用于

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