土壤脲酶的测定方法(改良靛酚蓝比色法)一、原理以尿素为底物,经培养后根据脲酶酶促产物-氨(忽略硝化过程造成的氨氮损失)在碱性介质中与苯酚、次氯酸钠作用生成蓝色的靛酚。该生成物数量与氨浓度成正比。后即称为靛酚蓝比色法,其结果精确性较高,重现性较好,在脲酶活性测定中的应用最为广泛。二、试剂1)甲苯1ml/ps注:甲苯易挥发,要在通风条件好的地方操作。2)5%尿素:称取5g尿素,用水溶至100ml。 10ml/ps3)柠檬酸盐缓冲液(PH6.7):184g柠檬酸和147.5g氢氧化钾(KOH)溶于蒸馏水。将两溶液合并,用1mol/LNaOH将PH调至6.7,用水稀释定容至1000ml。20ml/ps注:柠檬酸和氢氧化钾混合时大量放热,需小心缓慢混合,冷却后定容。4)苯酚钠溶液(1.35mol/L):62.5g苯酚溶于少量乙醇,加2ml甲醇和18.5ml丙酮,用乙醇稀释至100ml(A液),存于冰箱中;27gNaOH溶于100ml水(B液)。将A、B溶液保存在冰箱中。使用前将A液、B液各20ml混合,用蒸馏水稀释至100ml。4ml/p