12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm摇菌培养2小时。（5) 加入50l 100mM IPTG,1627摇菌培养18小时。（6) 收菌，将菌液倒入大离心管，2管/50ml菌液，4 5krpmx5min离心，弃上清。（7) 加入10ml PBS/管，重悬细胞,5krpm离心5min，弃上清。（8) 加入2mlPBS/管，重悬细胞。转移至5ml离心管。（9) 超声破壁破壁前，在细胞悬液中加20l 10mg/ml PMSF,80l蛋白酶抑制剂(100x)。破壁参数：Frequency:100200w60s， pause20s run 40s,5cycles破至菌体由浑浊变为澄清。加100l 20%TritonX100，冰上放置30
