制备细胞裂解物：1.每100ml培养物的细胞沉淀悬于4ml PBS;2.加入溶菌酶至终浓度1mg/ml，冰上放置30min;3.用针筒将10ml 0.2%Triton X-100强行注入细胞裂解物中，剧烈震动数次混匀；4.加入DNase和RNase至终浓度5ug/ml,4震动温育10min;5. 4 3000g(5000r/min)离心30min;6.上清转移到一只新试管，加入DTT至终浓度为1mmol/L;纯化融合蛋白：7.细胞裂解物与50%谷胱甘肽-琼脂糖树脂匀浆混合，每100ml 细胞培养物加2ml树脂，于室温下轻摇30min;8混合物于4以500g(2100r/min)离心5min,小心去掉上清并留样少许进行SDS-PAGE;9.沉淀中加入10倍标准体积的PBS,颠倒离心管数次混匀，洗去未与树脂结合的蛋白；10. 4以500g(2100r/min)离心5min,小心去掉上清并留样少许进行SDS-PAGE;11.重复步骤9和10两次；12.结合的GST融合蛋白可用谷胱甘肽洗脱缓冲液洗脱，也可用凝血酶，肠激酶或Xa因子切割
