GST-pull down 技术一 大量制备GST蛋白1 活化冻存菌种GST和GST-X：按1：50比例将表达蛋白的冻存菌液加入5（），37，140150rpm培养过夜2 将过夜培养物按1：100比例接入200ml（），220rpm，30培养至OD600=0.4-0.63 以预实验确定的最佳IPTG浓度、时间和温度诱导表达靶蛋白。（IPTG 0.5mM，20,150rpm培养1016小时）4 诱导适当时间后，4，5000g离心10min后弃上清。（如需要该步沉淀能保存在-80）5 重悬沉淀：10ml菌液沉淀用1ml PBS重悬6 冰上超声沉淀重悬液：2S 间隔1S 至悬液透明（ 一般可容性蛋白：10ml菌液沉淀用1ml PBS重悬液超声min可透明）7 10,000g*10min离心上清转移至新的离心管，加DTT至终浓度1mmol/L二 谷胱甘肽-琼脂糖树脂的处理1 轻轻颠倒树脂盛装容器，混成匀浆2 取适量匀浆放入离心管中，4，500g离心5min后弃上清（每10ml 细菌培养物可以用50
