引物稀释方法1页.docx

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引物稀释方法PCR引物稀释方法(-S为上游引物,-A为下游引物):1. 按照管壁上的nmol数加入10倍的灭过菌的纯化水稀释成100nmol/mL2. 各取上游引物(*-S)10uL,下游引物10uL加入到80uL灭过菌的纯化水中稀释成10nmol/mL3. 取稀释好的引物混合液2uL做PCR(25uL体系)定量PCR操作步骤参考(以FastStart Universal SYBR Green Master(Rox) Roche为例)1)取0.2ml PCR管,配制如下反应体系 2 qPCR Mix12.5l7.5M基因引物2.0l反转录产物2.5lddH2O8.0l2)PCR扩增预变性95,10min循环(40次)95,15s60,60s末段延伸60,5min溶解曲线7595,每20s升温1

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