引物设计需要注意事项(共4页).doc

上传人:晟*** 文档编号:6198288 上传时间:2021-08-22 格式:DOC 页数:4 大小:20KB
下载 相关 举报
引物设计需要注意事项(共4页).doc_第1页
第1页 / 共4页
引物设计需要注意事项(共4页).doc_第2页
第2页 / 共4页
引物设计需要注意事项(共4页).doc_第3页
第3页 / 共4页
引物设计需要注意事项(共4页).doc_第4页
第4页 / 共4页
亲,该文档总共4页,全部预览完了,如果喜欢就下载吧!
资源描述

引物设计需要注意事项一、PCR引物设计的11条黄金法则1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因,通过序列分析软件(比如DNAman)比对(Alignment),各基因相同的序列就是该基因的保守区。2.引物长度一般在1530碱基之间。引物长度(primer length)常用的是18-27 bp,但不应大于38,因为过长会导致其延伸温度大于74,不适于Taq DNA 聚合酶进行反应。3.引物GC含量在40%60%之间,Tm值最好接近72。GC含量(composition)过高或过低都不利于引发反应。上下游引物的GC含量不能相差太大。另外,上下游引物的Tm值(melting temperature)是寡核苷酸的解链温度,即在一定盐浓度条件下,50%寡核苷酸双链解链的温度。有效启动温度,一般高于Tm值510。若按公式Tm= 4(G+C)+2(A+T)估计引物的Tm值,则有效引物的Tm为5580,其Tm值最好接近72以使复性条件最佳。4.引物3端要避开密码子的第3位。如扩增编

展开阅读全文
相关资源
相关搜索

当前位置:首页 > 实用文档资料库 > 公文范文

Copyright © 2018-2021 Wenke99.com All rights reserved

工信部备案号浙ICP备20026746号-2  

公安局备案号:浙公网安备33038302330469号

本站为C2C交文档易平台,即用户上传的文档直接卖给下载用户,本站只是网络服务中间平台,所有原创文档下载所得归上传人所有,若您发现上传作品侵犯了您的权利,请立刻联系网站客服并提供证据,平台将在3个工作日内予以改正。