实验五 DNA的限制性酶切和琼脂糖电泳一、实验目的掌握DNA的限制性酶切的基本原理 和琼脂糖凝胶电泳的基本操作技术二、实验原理1、DNA的限制性酶切限制性内切酶是基因操作中不可缺少的工具酶，它能够识别双链DNA的特定位点并切开DNA，这个特定位点是一段具有旋转对称结构的DNA片段。绝大多数的限制酶识别长度为48个核苷酸且呈二重对称的特异序列。EcoRI的识别序列是GAATTC，BmHI的识别序列是GGATCC，HindIII的识别序列是AAGCTT。每种限制性内切酶都有特定的反应条件，如特定的pH范围，缓冲液组分，温育温度等，具体的使用也可参考有关的工具书或文献或产品说明。一般温度37，pH7.58.0对大多数酶来讲是适合的，但缓冲液的组分则变化很大，典型的组分应有Tris、NaCl、MgCl2，和巯基试剂(如巯基乙醇或二硫苏糖醇)。 典型的反应体系中包括lg或更少的DNA和1单位酶以及合适的反应介质。反应总体积通常控制在20和50之间，反应时间在1小时，而反应的终止则由EDTA溶液的加入完成，因为它能鳌合核酸酶活性所
