4%多聚甲醛固定微生物样品的原理标本中大多数神经激素、肽类物质,以及蛋白质为水溶性,在用于研究之前,常需固定, 即使其凝固以降低其水溶性。甲醛能与蛋白质的氨基反应,使蛋白质凝固,因此在医药上可做为检验时的组织固定剂、以及防腐剂等。在固定剂中,最常用的是多聚甲醛。常用固定液:固定剂品种很多,但大多属于醛类和醇类。其固定原理不同,各有优缺点。 醛类(常用甲醛、戊二醛和多聚甲醛)醇类(常用乙醇) 其它 (丙酮)(1)醛类甲醛(福尔马林)应用最广 原理:形成分子间的交联,影响蛋白构型而使之固定。 优点:形态结构保存好,且穿透性强,组织收缩少。 缺点:甲醛放置过久可氧化为甲酸,使溶液pH降低,影响染色;醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基,使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍;分子间交联形成的网格结构可能部分或完全掩盖某些抗原决定簇,使之不能充分暴露。可造成假阴性的染色结果。 注意事项:缩短固定时间,降低固定温度(4C),为此组织块不宜过厚。改用中性缓冲福尔马林,以pH值7.27.4 0.01mol/L的磷酸