ChIP-原理及实验方法(共14页).docx

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资源描述

染色质免疫沉淀技术(ChIP)实验方法实验原理染色质免疫沉淀技术(ChIP)通过与染色质片段共沉淀和PCR技术,在体内检测与特异蛋白质结合的DNA片段。ChIP技术最大的优点就是在活体细胞状态下研究了蛋白质和目的基因结合状况,减少了体外实验的误差。在活体细胞中,先对与调节蛋白结合的染色质进行分离,然后通过一定的方法(例如:超声波)随机剪切染色质,用调节蛋白的抗体沉淀目的染色质,再通过一定手段把目的染色质上的蛋白质去除掉,最后用PCR等方法检测鉴定共沉淀的DNA片段的特性。仪器和试剂真空设备、涡旋器、液氮、冷冻离心管、离心机、超声波粉碎仪、miracloth37%甲醛,2M甘氨酸,ddH2O,剪切的鲑精DNA/protein A琼脂糖珠(Sant cruz),蛋白酶K(14mg/ml),RNaseA,酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),氯仿,无水乙醇,提取缓冲液1(EB1):0.4M蔗糖;10mM Tris-HCl,pH8.0;5mM -ME;0.1mM PMSF;蛋白酶抑制剂混合物(aprotinin、pepstain A、Leupeptin、Anti

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