E.coli-DH5α感受态制备步骤(共1页).doc

Ecoli DH5感受态细胞制备的主要步骤： 从菌种的甘油冻存管中取一环菌液在LB平板上分区划线，37 培养至单菌落长出。 挑取平板上的单菌落转移到25 mL的LB培养基中（37 ，200 rpm）过夜培养。 取过夜培养的菌液200 L加入到20 mL的LB培养基中（37 ，200 rpm）培养至OD600为0.40.7. 培养好的菌液转移至预冷的50 mL离心管中，冰上静置10 min。 离心（4 ，2500 g，10 min）。 弃上清液，加入4 mL 0.1 mol/L CaCl2 ，冰上重悬后静置10 min。 离心（4 ，2500 g，10 min）。 弃上清，加入2 mL 0.1 mol/L CaCl2（溶液中含终浓度为15%的甘油），重悬沉淀，冰上静置30 min。 分装（100 L/tube），-80 保藏。