ELISA操作步骤(双抗体夹心法)1. 包被过程(注意设置空白对照,阴性对照):将所用抗原用包被稀释液稀释到适当浓度,每孔抗原加入100l, 置37,4h,或4,24h;弃去孔中液体,(为避免蒸发,板上应加盖或将板平放在底部有湿纱布的金属湿盒中)。2 PBS洗3次,每次3分钟。具体为.吸干或甩干孔内反应液;.用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去);浸泡,即将洗涤液注满板孔,放置1-2分钟,间歇摇动,浸泡时间不可随意缩短;吸干孔内液体,可甩去液体后在清洁毛巾或吸水纸上拍干;.重复操作涤3次。3. 加入待检测样品(建立合适的浓度梯度):检测时一般采用1:50-1:400的稀释度, 应采用较大稀释体积进行,一般保证样品吸取量20l。将稀释好的样品加入酶标反应孔中,每样品至少加双孔,每孔100l,置于37,40-60min。4 PBS洗3次,每次3分钟。5. 加入酶标抗体:酶标抗体: 根据酶结合物提供商提供的参考稀释度进行或建立浓度梯度,37,30-60min之间,短于30min往往结果不稳定,