生物学大实验(二)实验名称:质粒扩增、提取和鉴定实验实验目的 通过对智力扩增、提取和鉴定试验的实验原理介绍和实际操作,加深对分子生物学基本技术的理解和掌握。实验仪器设备:电子天平、高压蒸汽灭菌锅、摇床、离心机、不同型号移液枪若干支、磁力搅拌器、恒温水浴锅、电炉、制冰机、琼脂糖凝胶电泳仪、超净工作台等。实验原理:质粒主要存在于细菌、放线菌和真菌细胞中,通过对细菌、放线菌和真菌的培养来实现对质粒的扩增。经过处理的线状DNA在外界环境恢复正常的时候不能够复性 而质粒DNA可以复性,从而可以实现质粒DNA和染色体DNA的分离。限制性内切酶能特意地结合于一端被称为限制性酶识别系列的DNA系列之内或其附近的特异位点上,并切割DNA。当对提取的质粒DNA进行电泳时,同一质粒DNA其超螺旋形式的泳动速度要比开环和线状分子的泳动速度快。实验步骤:一 质粒扩增(1)普通LB固体培养基制备:制备LB培养基,倒入灭菌瓶中高压灭菌,待完全冷却后,保存备用。(2)将大肠杆菌接种于LB培养基中,37振荡培养过夜(200转/分)二 质粒DNA的提取(碱法)1将菌液