PCR优化问题汇总一、 PCR在产物序列中引入了错误？参考见解：1. 聚合酶忠实性低：使用带有校正活性的热稳定聚合酶，如Platinum Pfx DNA聚合酶。2. 循环数太多：降低循环数。3. 四种dNTP的浓度不同：制备新的dNTP混合物，保证四种核苷浓度相同。使用预混合物。二、PCR跑胶，目的条带很亮，但是边沿不清楚，前后有拖尾现象？参考见解：1. 模板可能有降解，建议避免反复冻融，放置时间不能太长。模板的质量是最重要的。2. 抽提RNA时有污染，包括基因组DNA污染和蛋白质污染，需重做抽提。3. 提高退火温度，减少非特异性扩增。4. 减少循环次数，减少非特异性扩增。5. 电泳缓冲液时间太长，PH值和盐离子浓度明显改变。6. 电泳时电压不能太高，8V/cm。7. 一般来讲，基于promega和TaKaRa的PCR反应体系中，Mg和dNTP的浓度是相匹配的，不需改动。8. 加样的量过大。过多的量会造成加样孔超载，从而导致拖尾和弥散，对于较大的DNA此现象更明显。9. 制胶过程中胶孔没制好。10. EB没有冲洗干净。
