PCR反应体系与反应条件 标准的PCR反应体系: 10扩增缓冲液 10ul 4种dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10100pmol 模板DNA 0.12ug Taq DNA聚合酶 2.5u Mg2+ 1.5mmol/L 加双或三蒸水至 100ulPCR反应五要素: 参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效
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