Taq酶的活性测定方法2页.docx

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Taq酶的活性测定方法。(原理、方法、数据计算、结论) Taq酶是从水生栖热菌 Thermus Aquaticus ( Taq )中分离出的具有热稳定性的DNA聚合酶。由于其自身的热稳定性,广泛应用于PCR反应中。酶活性测定常用的方法有终点法和动力学方法两类。终点法是测定完成一定量反应所需要时间,动力学方法是测定一定时间内所起的化学反应量。下面是介绍测定Taq酶活性的其中一种方法。Taq酶活性的测定方法:1、生物发光技术(1)原理: 在DNA聚合酶催化DNA分子的聚合过程中伴随着焦磷酸(PPi)的生成,利用ATP硫酰化酶将焦磷酸定量转化成ATP,再利用虫荧光素酶系统发光检测ATP的量,从而确定PPi的量,以PCR反应体系中PPi的量来反映Taq酶的活性。(2)方法: ATP 发光检测试剂盒的预处理: 在商品化的ATP发光检测试剂盒中,为了增强发光的稳定性,加入了微量的焦磷酸,因此不能直接使用ATP发光试剂盒来检测焦磷酸。为了消除试剂中原有的焦磷酸,首先用低浓度的焦磷酸酶处理ATP发光检测试剂盒,每1000L混合发光液中加入0.04U焦磷酸

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