Western-Blotting常见问题及措施(共4页).doc

Western Blotting 常见问题及解决方法（参照Pierce公司讲座PPT）1.比较均一的高背景原因：解决办法抗体浓度太高优化/降低一抗和二抗浓度封闭液不适合比较尝试不同的封闭液封闭不完全封闭液的选择与优化增加封闭液中蛋白质浓度优化封闭时间和温度（RT至少1小时；4过夜）封闭液中加入Tween-20；浓度0.05抗体稀释液中加入Tween-20；浓度0.05抗体与其它蛋白质交叉反应更换不同的封闭液；勿在Biotin/avidin体系中使用脱脂奶粉封闭降低二抗浓度检测二抗与膜的交叉反应性原因：解决办法漂洗不完全增加漂洗时间和缓冲液体积漂洗液中加入Tween-20；浓度0.05曝光时间太长缩短曝光时间膜的问题使用干净镊子；戴手套操作换一张新膜用足够的液体，膜始终保持湿润孵育时使用脱色摇床避免膜重叠，互相覆盖小心操作，勿毁损膜缓冲液污染使用新缓冲液过滤缓冲液2. 斑点、发泡式或闪烁式的高背景原因：解决办法抗体浓度太高