western实验步骤与注意事项4页.docx

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葵花宝典致亲爱的师弟师妹:本着不希望你们来到实验面临一些束手无策的窘境,师姐在这里把自己所学和资源略写一二。1、 来到实验室,无论你喜欢不喜欢,乐不乐意,一定要把实验室的师兄师姐的名字都记住,以及实验室里有什么仪器!2、 关于实验部分1、 组织蛋白提取:方法一:(1)4下,先生理盐水洗,再加入蛋白提取液,剪刀剪碎,匀质器6000,循环六次,每次都拿下来冰镇,防止蛋白变性,最后14000转,20min,4(2) 跑western之前,需测BCA,以保证每个组分上样的蛋白总质量一样(此处为定量实验,看目标蛋白的表达量,若仅仅定性则无需做BCA)注意事项:匀质器需要用的小管和玻璃球在郝荣华师姐那里,先加玻璃球一般,目测大概三四毫米高度就行(包括管底小尖尖),且溶液必须装满才振荡效果好,因此,加入细胞裂解液多,容易导致蛋白浓度低。方法二:(1) 取冰(东边实验室,最后面有制冰机)(2) 将软骨从80冰箱取出,置于冰面上解冻(3) 去细胞室的液氮罐里,取出少量液氮置于泡沫箱内,(4) 转移至实验室内,取出少量,倒

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