western-blot常见问题及解答(共3页).doc

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常见问题及解答:1、两快玻璃板之间灌胶,胶为什么总是不平?1) 你的玻璃洗干净没有?应该要洗得非常干净!2) 过硫酸铵和TEMED的加量不合适,加量相对较多,凝胶凝固过快也会胶不平,最多按照分子克隆加倍3) 加完试剂以后没有很好的摇匀,导致有些部位的聚合剂浓度过高,聚合相对较快造成胶不平;4) 稍微注意手法,均匀加入5) 灌胶后应该用水或者正丁醇压胶面或用20%的乙醇封顶(没有毒性可以除气泡,使用效果极好)。战友小新723认为:“第一天灌胶后,用乙醇直接压,待乙醇挥发完毕后,上面加一层水,第二天电泳用,效果很好。不用正丁醇,乙醇比正丁醇效果要好多了”。6) 边缘胶是不容易聚合完全的,灌完胶后要立即加无水正丁醇覆盖,浓度越低的胶越不要使用双蒸水压顶,另外还可以在压顶试剂如正丁醇中添加少许AP来增加边缘胶的凝聚强度7) 温度也是影响胶聚合的重要因素,我们有些同学为了让胶更快的凝固而把胶放到50度的温箱,由于受热不均匀,造成胶聚合不均匀。2、胶为什么总是漏?1) 每次电泳完后,洗净玻璃、胶条和其它附件,下次用之前,用75酒

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