Western-blot(蛋白印迹法)详细步骤(共5页).doc

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资源描述

Western blot(蛋白印迹法)详细步骤一、 组织的研磨准备:研钵、研磨棒、EP管、药匙、液氮、液氮匙、自封袋、一次性手套、棉手套步骤:用研磨棒将装有冻存组织的EP管敲碎,取出组织,在研钵中盛满液氮,用力敲碎组织,研磨。 研磨过程中一旦液氮干了,立即加入液氮,保持研磨在液氮中进行,直至组织呈干粉状。 用在液氮中浸泡过的药匙将研磨好的粉末盛入新的EP管中。 装有组织粉末的EP管现在液氮中保存,待所有组织都研磨结束后装入自封袋,于-80保存。注意:1.研钵使用前要用锡纸包口、研磨棒用锡纸包头,在烘箱中烘烤180至少3h以上。 2.组织研磨成粉末后待液氮全部挥发后再将组织粉末装管。 3.每种样品都最好留有副管,备用。二、 裂解提蛋白准备:裂解液配制比例 RIPA:PMSF=1000:10=100:1 若需要加入蛋白酶抑制剂,则比例一般为1:1000(即1ml裂解液加1l蛋白酶抑制剂)步骤:将RIPA和PMSF按比例混匀,加入到装有组织粉末的EP管中,一般加入3

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