Western-Blot基本原理、过程及注意事项(共4页).doc

Western Blot基本原理、过程及注意事项原理是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。主要有三个过程：蛋白质电泳、转膜、检测。样品的准备样品种类主要有培养的细胞、组织（需磨碎）、特殊细胞（切割下来的肿瘤细胞）等。 1、 裂解液主要有RIPA和三去污两种，RIPA适用于细胞质中蛋白检测，而三去污适用于总蛋白。三去污又分为离子型和非离子型。离子型的裂解能力较强如SDS等，非离子型的包括NP-40、Tritonx-100。2、 裂解液的成分， 作用试剂增加离子强度NaclpHTris-盐酸缓冲液裂解剂SDS溶剂水蛋白酶抑制剂PMSF 、Cocktail等磷酸酶抑制剂Cocktail等3、 样品缓冲液 sample buffer作用试剂增加负电SDSpHTris缓冲液抗氧化DTT密度甘油指示剂溴酚蓝备注：1、样品应保持低温，