案例一:某特定化合物系强极性有机小分子,极性大、难挥发,采用硅胶柱层析不易提纯,需用其他分离技术来纯化。解决方法:终极目的是提纯该物质。总体策略“先看,后想,再行动”“看化学结构,想理化性质,定纯化方法。由于该化合物及相关杂质的理化性质决定了难以用常规的重结晶、蒸馏(精馏)、硅胶柱层析来分离纯化。结合实验室的具体条件,考虑采用反相制备型.高效液相色谱法(Preparative HPLC)来分离纯化之。方法步骤:1.了解样品及有关组分的情况2.样品预处理3.建立Analytical HPLCMethod4.优化Preparative HPLC 条件5.检查出现的问题6.回收纯化的物质。 更细致地来讲,开始Preparative HPLC 之前须明白:待分离样品及有关组分的信息所含化合物的结构信息(重点关注酸、碱性等极性基团)、UV 光谱图(涉及到后续试验检测波长设定)、分子量(分离后目标化合物LC-MS 检测确认)、待分离体系的复杂程度(所含化合物的数目,preparative HPLC 之前是否须经flash column 粗分);