免疫荧光技术常见问题及分析免疫荧光技术(Immunofluorescence technique )又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。主要是利用荧光标记的抗体与待测抗原间反应进行抗原或者半抗原物质定位的技术。本文总结了免疫荧光技术常见的问题及解析。1、问：近期要做免疫荧光双标，不知哪位有免疫荧光双标技术的详细步骤及其注意事项?参考见解：我正在做冰冻组织切片的免疫荧光双染。我的经验是：(1)选取一抗时要来源于两种不同的动物，我用的是来源于rabbit和rat的抗体，二抗则是不同荧光信号标记的，我用的是donkey anti-rabbit-FITC(绿)和donkey anti-rat-Tex-Red(红)。(2)我的做法是两种一抗同时孵育，然后两种二抗同时孵育。抗体浓度、孵育时间要仔细摸索，我感觉一抗4度孵育过夜比较好，背景比较清晰。(3)我的阳性对照用的是阳性组织切片，阴性对照则分别是家兔和大鼠的IgG，荧光标记物对照是PBS+荧光标记物。(4)封闭血清与二抗来源动物一致，我用的是10%的正常donkey血清。(5)其余步骤同一般免疫荧光
