菌落的PCR鉴定(共2页).doc

实验六 菌落的PCR鉴定【实验目的】通过本实验学习菌落PCR的基本原理与实验技术。【实验原理】重组子经过蓝白斑筛选后（具有假阳性），接下来可通过菌落PCR方法对重组子进一步进行快速鉴定。以重组质粒作为PCR扩增模板。采用外源基因特异性引物进行扩增，如果重组质粒转化入宿主细胞，则可以扩增得到预期大小的目的片段。【实验步骤】 用200 L的黄色枪头挑取转化平板上白色的单菌落于15 L无菌水中， 吹打混匀，从中取2L菌液作为菌落PCR模板。1在200 l PCR 管内配制20 l 反应体系： 反应物 体积/L 模板DNA 2.0 灭菌蒸馏水（ddH2O) 10.3 10PCR 缓冲液 2.0 dNTP （2.5mM） 1.6 引物1 （2M） 2.0 引物