做蛋白表达实验的时候，有时候实验会觉得参考和克隆的蛋白基因序列完全没有问题，蛋白电泳就是没有结果。就个人经验总结和一些网络资源汇总了下蛋白不表达的原因。1.载体构建错误。这个屡见不鲜，很多克隆新人经常弄错读码框。比如的pQE系列载体，其克隆位点常有一两个碱基的区别;另外有些酶产生粘端有些酶产生平端，这些都容易导致读码框错误，从而表达不出来。2.宿主菌选择不当。不同的宿主菌其是不一样的。有些经过特殊修饰的载体，或者特殊用途的载体，或者有特殊启动子的载体，必须选择合适的宿主菌进行表达。因此，当你的蛋白没有表达出来时，可以考虑更换宿主菌。下图所示：3.密码子的使用频率低。有些基因其本身含有许多稀有密码子，尤其是起始密码之后的15个碱基之内的稀有密码子，对蛋白表达有着很重要的影响。优化密码子对原核表达似乎效果很好，对真核表达系统未见得有很好的效果。曾经有某人在毕赤酵母表达某蛋白两年未果，试图将密码子优化进行表达，结果还是没有表达。一气之下将该优化的克隆到原核表达载体，表达量居然出奇地高!这是一个辛酸的笑话，但是一个真实的故事。但是有一点我可以有很大把握的说：对于真核表达，密码子
