切胶纯化蛋白制备方法-杨贝贝一、切胶纯化1取500 L包涵体提取液处理后不插样品梳直接上样， 按常规方法进行 SDS-PAGE；电泳毕， 将切下的胶放入一干净大平皿中， 用适量的 0.25 mol/L的 KCl溶液染色 5 min；2用手术刀片小心切下染成银白色的目的带并移入另一平皿中；3用 PBS洗 3次或用蒸馏水连续冲洗 3 min后， 将胶条移入一干净的小袋中、碾碎（不好碾碎）；4为进一步促进蛋白释放，可-20反复冻溶 3次以上（冻融次数多，蛋白回收效率高），3000g,10min离心， 取上清,再用0.45um滤膜过滤，测定蛋白浓度，用于免疫小鼠或ELISA包被抗原。冻融方法：装入密封袋，碾成小的碎块后，冻于-20。约2h后（胶冻上即可）取出，碾碎；继续放-20；反复数次。1过滤：加适量PBS，吹打混匀，吸入注射器中，在吹打几次，0.22um filter过滤（可以多加几次PBS过滤2-3遍，以最大量回收目的蛋白）或者：若胶碾得过碎，不应使用注射器过滤（会堵住滤膜），可以加PBS反复吹打，转入50/15ml EP管，35
