蛋白含量测定及western步骤(共4页).doc

蛋白的提取和定量肺组织用预冷1TBS洗净后，加入含PMSF的RIPA buffer（冰上操作，310ul,决定未来的蛋白浓度和蛋白液体积）,50-60mg肺组织砸碎放入1.5ml离心管，冰上孵育1h，10000转4离心10min，转上清至新管。裂解液分装后保存于-70蛋白质定量：BCA蛋白测定法根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50：1）配制适量BCA工作液，充分混匀。BCA工作液室温24小时内稳定。完全溶解蛋白标准品(BCA试剂盒中，BSA原浓度2mg/mL),稀释到1mg/mL。将标准品按0，2，5，10，15，20，25 ul标准品孔中，加蒸馏水稀释标准品的溶液补足到25.1234567BCA( ul)2002002002002002002001mg/mLBSA02510152025ddH2O252320151050加样品2uL加到96孔板的样品孔中，加蒸馏水23微升。各孔加入200微升