磷脂脂肪酸的测定方法1页.doc

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PLFA分析采用温和碱性甲酯化方法100。实验步骤:1) 称3g土壤与15ml 0.2M甲醇化的KOH混匀,放入离心管中。2) 在37C培养1h,每10min漩涡震荡一次。3) 加入3ml 1.0M冰醋酸10ml正己烷,分层。4) 4800r离心15min。5) 取上清移至试管,在氮气下吹干。6) 将试管内磷脂脂肪酸溶解于0.5ml 1:1甲基叔丁基醚:正己烷,转移到气质联用色谱分析用小管待分析。将处理好的样品用Agilent 6890GC/5973MS气质联用仪进行分析,参数设定如下:色谱柱:利用处理后的石英毛细管柱(0.25mm30m0.25m)。 样口温度为250C,不分流进样。采用恒流模式,流速为0.8ml/min,载气为高纯氦气。程序升温:80C (保持2min),以50C /min的速度升至150C (保持2min),以2.5C /min的速度升至195C (保持3min),再以2.5C /min的速度升至240C (保持5min)。电离方式:EI(70eV)。离子源温度:150C。四

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