农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收集菌体；（4） 用预冷的10%无菌甘油洗菌体3次后用2 ml预冷的10%无菌甘油重悬沉淀，分装后于-70保存备用；（5） 取重组质粒（pROK2-LbDREB）1 l，加入100 l EHA105感受态细胞，混匀后冰上放置；（6） 将混合液放入预冷的电击杯中，1 800 V电击；（7） 电击完成后迅速取出，加入500 l LB液体培养基，迅速吸打混匀，尽可能多的将混合液移入无菌的离心管中，28摇菌1 h复苏；（8） 取适量菌液涂布于含50 mg/l 卡那、50 mg/l 利福平的LB固体培养基上，28培养3648 h；农杆菌感受态细胞制备a. 在新活化的农杆菌EHA105/GV3101平板上，挑取单克
