冰冻切片免疫荧光染色流程(表面分子，以CD4为例)（1） 冰冻切片室温晾干15分钟；（2） 用组化油笔将待染组织圈好，置PBS中浸泡10分钟，以去除OCT；（3） 用含10正常山羊血清的PBS室温封闭切片1 小时（此步可以不洗涤，把封闭液吸干即可）；（4） 加入CD4单抗(1:100; SeroTec, Inc, Raleigh, NC, USA)，4孵育过夜；（5） PBS洗3次，每次10分钟；（6） 加入罗丹明标记的羊抗小鼠的IgG二抗(1:50; Sigma 公司)，37孵育1小时；（7） PBS洗3次，每次15分钟；（8） 封片后，荧光显微镜观察结果并拍照；（9） 在每切片中随机选择5个视野计数阳性细胞数。注意事项：（1）整个实验过程中勿使表面干燥 （2）稀释、加二抗（荧光抗体）及此后的洗涤过程中注意避光附注1：如目的分子为胞内分子，各种液体中需要加透膜剂0.3%TrixtonX100。附注2：所用液体（表面分子染色不用0.3%TrixtonX100）：（1） pH7.4 0.01MPB
