退火（denaturation/annealing）两条寡核苷酸引物在适当温度下，分别依据碱基互补结合在模板DNA扩增区域两端，称为退火。此时，DNA聚合酶便开始合成新链。由于加入的引物分子数远远大于模板DNA 分子数，因此引物与模板DNA形成复合物的几率远远大于DNA分子自身的复性配对表达载体（expressing vector） 是用来在受体细胞中表达（转录和翻译）外源基因的载体。除了具备复制起始点、筛选标志和多克隆位点外，还需要带有在真核细胞中表达所必需的DNA构件，如启动子、终止子、阻遏蛋白结合位点，核糖体结合位点多克隆位点（multiple cloning site）载体上含有一个人工合成的DNA片段，其上含有多个单一酶切位点，是外源DNA插入部位，具备条件是：载体中的一段碱基序列，由数个酶切位点组成，这些酶切位点在载体上都是单一位点。非融合蛋白：利用DNA重组技术，将一段外源基因导入细菌中，不与细菌中表达的任何蛋白或多肽融合在一起的外源蛋白产物，其优点在于它具有非常近似于真核生物体内蛋白质的结构，因此其表达产物的生物学功能也非常接近于生物体内天然蛋白质目的基
