原核表达系统是目前使用最广泛、最完善的重组蛋白表达系统,具有遗传背景清晰、表达周期快、表达量高、成本低等优势,缺点是无法进行蛋白的翻译后修饰,得到具有生物活性蛋白的几率较小。原核表达系统适用于表达原核来源的蛋白或不需要翻译后修饰的真核来源蛋白。在原核蛋白表达过程中,需要综合考虑表达菌株、质粒载体、表达条件三大因素,以获得最满意的表达效果。下面为大家一一介绍这三大因素的选择和优化。1. 表达菌株菌株的选择往往是大家最容易忽视的,大多数人会选择使用自己实验室有的或用过的表达菌株。当蛋白表达效果不佳时,大多会在质粒载体或表达条件上找原因,而不会考虑菌株的选择是否合适。但作为表达宿主,菌株一定会对外源基因表达蛋白产生影响。图1 大肠杆菌原核表达系统常用的菌株包括大肠杆菌、芽孢杆菌和链霉菌。其中运用最为广泛的就是大肠杆菌表达系统。以下为大家列出了一些常用的大肠杆菌表达菌株,可根据不同的需求进行选择。常用表达菌株应用BL21对照株,不能使用T7启动子,蛋白酶敲除BL21 (DE3)常规表达宿主菌,蛋白酶敲除BL21trxB (DE3)