园艺-拟南芥侵染和筛选的流程(共3页).docx

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资源描述

1 摇菌(1)小摇:在超净工作台中取出无菌离心管,加入4ml纯净LB液体培养基,加入4ul 50mg/ml浓度的卡那霉素,加入8ul 10mg/ml浓度的利福霉素,加入阳性菌菌液,摇匀;在摇床中28培养2天;(2) 大摇:在250ml三角瓶中加入150ml纯净LB液体培养基,加入150ul 50mg/ml浓度的卡那霉素,加入300ul 10mg/ml浓度的利福霉素,加入1.5ml菌液,过夜摇菌。2 配侵染液(1)1L超纯水中加入10g蔗糖及40ul表面活性剂 Silwet L-77,磁力加热搅拌器搅拌均匀;(2)大摇后的菌液用分光光度计测OD600,用离心后的上清液作为对照,菌液OD600在0.81.0之间时,可以进行下一步;(3)将菌液倒入50ml圆底离心管中,常温4000g离心10分钟,收集菌株;(4)倒掉上清,加入少许侵染液,用移液器把菌打散打匀,倒入侵染液中。3 农杆菌花序侵染(1)托盘垫上报纸,润湿,取八盆培养良好且适合侵染的拟南芥,每盆四株;(2)将全部的花全浸到侵染液中,全部的花均需浸湿,若花无法碰到侵染液,则用戴手套的手浸湿,

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