基因型鉴定(共1页).docx

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基因型鉴定PCR protocol1. 剪取2mm趾甲或尾端放入离心管中。2. 裂解鼠尾a. 鼠尾裂解法:每个样品中加入200l 鼠尾裂解液 + 5l 蛋白酶, 56 过夜,实验前98 金属浴10 min,立即放入冰盒中冷却。(鼠尾裂解液:0.5 SDS、0.1M NaCl、0.05M EDTA、0.01M Tris.C1(pH8.0))b. 强碱裂解法:向样品中加入100l 50mM NaOH,96 金属浴10 min,在金属浴中冷却至40左右(增加裂解效率),然后自然冷却至室温;向裂解液中加入20l 1M Tris (PH 8.0) 5 mM EDTA后涡旋5 sec,中和强碱。3. WT和KO鼠 PCR体系(20l)Mix 10 l (使用Easy Tap PCR mix)R/F Primer 各0.4 lSample 2lddHO2 7.2l注备:由于分样时损失,先配制2n+2管量的(Mix+ ddHO2),均匀分为两份,分别加入n+1的

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