基因克隆及转基因方法4页.doc

基因克隆及转基因1、 基因克隆及转基因过程1、 设计引物软件是DNASTAR.Lasergene.v7.1，用到里面的PrimerSelect和EditSeq。一般原则：1、长度：18-25； 2、GC含量：40-60，正反向引物相差不要大于5%； 3、Tm值：55以上（到65），实在不行50以上也可以，正反向引物相差不要大 于5； 4、3端结尾最好是GC，其次是T，不要A； 5、正反向引物连续配对数小于4； 6、在NCBI上的Primer Blast上看引物特异性如何； （如果克隆的话不能满足条件也没办法。）不是必须条件，但可以考虑：多个基因设计引物时，可尽量使Tm值相似，方便PCR。步骤：一、打开PrimerSelect和EditSeq。二、在EditSeq中输入你的序列。引物有一对F和R1、对于F是从5到3，在序列的前部分选择长度为18-25bp的碱基，如