基因克隆步骤完整版4页.docx

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资源描述

1总RNA提取(1) 液氮研磨或冰上匀浆实验材料;先将1ml Trizol加到离心管中待用(2) 将研磨好的样品加到离心管中混匀,室温放置5 min;打开离心机预冷(3) 加200 L氯仿,振荡15 sec,室温放置3 min,分层;(4) 4oC,12,000g,离心15 min;(5) 取上清,加500 L异丙醇,混匀,室温放置10 min;(6) 4oC,12,000g,离心10 min;(7) 弃上清,加1 mL75%乙醇,漂浮洗涤沉淀,振荡充分;再用100%乙醇清洗(8) 4oC,7,500g,离心5 min;(9) 弃上清,离心,用枪吸取多余液体,放在超净台里干燥后,加50 L DEPC水,80oC保存。此操作中所用到的器皿均需经过DEPC灭活RNA酶处理。提取的总RNA需经RNA电泳检测质量,并用紫外分光光度计测定浓度。OD260值为核酸的吸收值,OD280值为蛋白的吸收值,OD260/280值在1.8-2.0间一般说明该核酸蛋白含量在允许的范围内,可正常使用;此外还有OD230值为多糖和酚类的吸收值,比较干净的核酸OD26

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