外周血中PBMC分离2页.docx

外周血中PBMC分离原 理 外周血各种血细胞的密度不尽相同，利用淋巴细胞分层液（Ficoll）作密度梯度离心，使一定比重的细胞群按相应密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。 实验步骤：1.采血，稀释（外周血：稀释液=1：2）2.在离心管中加入Ficoll，沿倾斜的管壁缓缓加入稀释的外周血（Ficoll：稀释血=1：2）3.18，1500r/min，离心30min4.轻轻吸取PBMC层移入另一试管中5.加足量稀释液充分洗涤，1800 r/min离心5min ，弃上清。分离全血中的PBMC注意事项：1 每毫升外周血液大约可获1106单个核细胞2 Ficoll应适量，外周血应充分稀释，温度直接影响到Ficoll的比重和分离效果3 在Ficoll上加入稀释外周血时，应缓慢加，以免冲散界面4 吸取单个核细胞层时，应避免吸出过多的上清液或分层液而导致血小板污染