外周血PBMC的分离2页.doc

外周血PBMC的分离原 理n 外周血各种血细胞的密度不尽相同，利用淋巴细胞分层液（Ficoll）作密度梯度离心，使一定比重的细胞群按相应密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。 1.093外周血红细胞粒细胞单个核细胞血小板淋巴细胞单核细胞1.0301.0351.0751.090Ficoll：1.0770.001 (PBMC)1.0921500rpm, 20 , 30minPBMC红细胞粒细胞Ficoll稀释外周血Ficoll稀释的血浆、血小板实验步骤n 1.采血，稀释 （外周血：稀释液=1：2）n 2.在离心管中加入Ficoll，沿倾斜的管壁缓缓加入稀释的外周血（Ficoll：稀释血=1：2）n 3.18，1500r/min，离心30minn 4. 轻轻吸取PBMC层移入另一试管中n 5.加足量稀释液充分洗涤，1800 r/min离心5min ，弃上清。注意事项n 每毫升外周血液大约可获1106单个核细胞